Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Rab 14 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-427035
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- Rab 14 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico Rab 14, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Rab 14 Anticuerpo (D-5): sc-271401
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Rab 14 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-427035 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Rab14 codifica Rab14, una pequeña GTPasa que regula el tráfico vesicular entre los endosomas, el aparato de Golgi y la membrana plasmática, coordinando la clasificación de la carga y el reciclaje de membrana. Rab14 participa en procesos de reciclaje endocítico y de transporte secretor que determinan la disponibilidad de receptores, la localización de transportadores de nutrientes y la dinámica de la membrana. A través de sus funciones en la maduración de endosomas y la organización de nodos de tráfico, Rab14 influye en vías relacionadas con la polaridad celular, la citocinesis y la regulación metabólica. La desregulación del tráfico dependiente de Rab14 se ha asociado, en sistemas experimentales, con fenotipos relevantes para la señalización oncogénica, el transporte sensible a la insulina y la remodelación de vacuolas que contienen patógenos.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO Rab 14 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Rab14 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Rab14 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Rab14 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Rab 14.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Rab14 para la investigación de la señalización de Rab 14, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Rab14 críticos para la función de Rab 14
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Rab14 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido Rab 14 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Rab 14 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Rab14. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Rab 14 (m) y el plásmido HDR Rab 14 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Rab14 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Rab14 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.