Plásmido CRISPR de Activación (h) Rab 11B: sc-402256-ACT

RAB11B codifica la pequeña GTPasa Rab11B, un regulador clave de la dinámica de los endosomas de reciclaje que coordina el tráfico de membranas desde los endosomas de vuelta a la membrana plasmática y a través de la red trans-Golgi. Al alternar entre los estados unidos a GDP y a GTP, Rab11B ayuda a controlar los eventos de gemación, transporte y fusión de vesículas que determinan el reciclaje de receptores, la renovación de integrinas y la entrega polarizada de carga. La señalización de la familia Rab11 se interseca con la remodelación del citoesqueleto y los programas de migración celular mediante interacciones con efectores que influyen en la organización de la actina y la composición de la membrana. La desregulación del reciclaje endocítico y del transporte vesicular asociada a la actividad de RAB11B se ha vinculado con alteraciones de la homeostasis de señalización y con fenotipos relevantes para la invasión de células cancerosas, la neurobiología y mecanismos de enfermedad más amplios relacionados con el tráfico intracelular.

Rab 11B El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de RAB11B sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Rab 11B El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus RAB11B en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional RAB11B, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Rab 11B. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo RAB11B y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Rab 11B en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Rab 11B en células tumorales con expresión de RAB11B silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.