Plásmido Doble Nickase (h) Rab 11A: sc-400617-NIC

RAB11A codifica la pequeña GTPasa Rab11A, un regulador central de la dinámica de los endosomas de reciclaje y del tráfico de membrana, que coordina el reciclaje endocítico, la gemación de vesículas y la entrega de carga a la membrana plasmática. Rab11A actúa junto con las proteínas que interactúan con la familia Rab11 y con el exocisto para controlar el reciclaje de receptores, el recambio de integrinas, el transporte polarizado y la abscisión citocinética, vinculándola con la remodelación del citoesqueleto y la migración celular. A través de sus funciones en la clasificación y el tráfico de receptores de señalización y componentes de las uniones celulares, Rab11A influye en vías que determinan la polaridad epitelial y la capacidad de respuesta a factores de crecimiento. La desregulación del tráfico dependiente de Rab11A se ha asociado con cambios en la invasión y el comportamiento metastásico en modelos de cáncer, y la alteración del reciclaje endosomal también se ha implicado en mecanismos de enfermedades neurodegenerativas e infecciosas.

Rab 11A El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus RAB11A en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de RAB11A. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de RAB11A. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con RAB11A alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.