Plásmido CRISPR de Activación (m) Rab 10: sc-422551-ACT

Rab10 codifica Rab10, una pequeña GTPasa relacionada con Ras que coordina el tráfico de membranas al regular la gemación, el transporte, el anclaje y la fusión de vesículas entre endosomas, vías de reciclaje y la red trans del Golgi. En células de ratón, la actividad de Rab10 favorece la exocitosis polarizada, el tráfico de vesículas de GLUT4, la maduración de autofagosomas y el reciclaje de receptores, vinculándola con la señalización PI3K–AKT, la clasificación endosomal y la dinámica del citoesqueleto. La alteración del tráfico dependiente de Rab10 se ha asociado con cambios en la respuesta a la insulina, la función de células inmunitarias y la homeostasis neuronal, lo que convierte a Rab10 en un nodo útil para estudiar in vivo y en modelos de cultivo rutas relevantes para el metabolismo y la neurodegeneración.

Rab 10 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Rab10 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Rab 10 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Rab10 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Rab10, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Rab 10. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Rab10 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Rab 10 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Rab 10 en células tumorales con expresión de Rab10 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.