Plasmide CRISPR d'Activation (h) quiescin Q6: sc-405059-ACT

Le gène humain **QSOX1** code la quiescine Q6, une oxydase des groupes sulfhydryles dépendante du FAD qui catalyse la formation de ponts disulfure et contribue au repliement oxydatif des protéines dans la voie de sécrétion et la matrice extracellulaire. En générant des ponts disulfure et en produisant du peroxyde d’hydrogène comme sous-produit, QSOX1 influence l’homéostasie rédox, la maturation des protéines et les processus de remodelage de la matrice qui affectent l’adhésion et la migration cellulaires. L’activité de QSOX1 a été associée à des modifications de l’organisation du microenvironnement tumoral, au remodelage fibrotique et à des contextes de signalisation inflammatoire, ce qui en fait un nœud pertinent pour étudier la protéostasie extracellulaire liée aux maladies. Son expression et sa fonction sont également impliquées dans des voies d’adaptation au stress qui coordonnent la sécrétion, le trafic RE/voie sécrétoire et la signalisation dépendante du rédox.

quiescin Q6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de QSOX1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

quiescin Q6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus QSOX1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription QSOX1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de quiescin Q6. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus QSOX1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de quiescin Q6 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie quiescin Q6 dans les cellules tumorales présentant une expression de QSOX1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.