QPCT Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405768

Descripción general

QPCT (glutaminil‑péptido ciclotransferasa) es una enzima secretada y asociada al aparato de Golgi que cataliza la formación de piroglutamato en el extremo N de proteínas y péptidos, una modificación postraduccional que puede influir en la estabilidad frente a la proteólisis, las interacciones con receptores y la bioactividad peptídica. Al convertir residuos N‑terminales de glutamina o glutamato en piroglutamato, QPCT contribuye a la maduración de proteínas dentro de la vía secretora y modula contextos de señalización extracelular. Esta actividad se cruza con vías que regulan el procesamiento de hormonas peptídicas y neuropéptidos, la proteostasis extracelular y la secreción regulada. En la literatura, la piroglutamilación alterada se ha vinculado con la agregación proteica y la modificación de péptidos asociada a la neurodegeneración, lo que respalda a QPCT como un nodo mecanístico para estudiar la biología de proteoformas relevante para enfermedades.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO QPCT (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen QPCT en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del QPCT junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de QPCT tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína QPCT.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en QPCT para la investigación de la señalización de QPCT, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de QPCT críticos para la función de QPCT
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de QPCT para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido QPCT CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido QPCT CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus QPCT. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR QPCT (h) y el plásmido HDR QPCT (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología QPCT para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana QPCT definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.