QIP1 Double Nickase Plasmid (h): sc-405442-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das QIP1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- QIP1 Double-Nickase-Plasmid (h) und QIP1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf KPNA4 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: QIP1: sc-101547
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
QIP1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-405442-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
QIP1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-405442-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KPNA4 kodiert Karyopherin‑Untereinheit Alpha 4 (QIP1), einen Adapter der Importin‑α‑Familie, der klassische nukleäre Lokalisationssignale erkennt und Importin‑β rekrutiert, um die Proteintranslokation durch den Kernporenkomplex zu vermitteln. Durch die Kontrolle des nukleo‑zytoplasmatischen Transports prägt KPNA4 Transkriptionsprogramme, den Zellzyklusfortschritt und stressresponsive Signalwege, indem es den nukleären Zugang wichtiger Transkriptionsfaktoren und regulatorischer Proteine steuert. Veränderte Dynamiken des nukleären Imports unter Beteiligung von KPNA4 wurden in krebsrelevanten Kontexten mit fehlregulierter Proliferation, Invasion und Signalwegen der Genomstabilität in Verbindung gebracht und können zelluläre Antworten auf DNA‑Schäden und entzündliche Reize beeinflussen. Als zentraler Knotenpunkt im nukleären Transport wird KPNA4 häufig untersucht, um die Verschaltung von Signalwegen aufzuklären, die von einer regulierten nukleären Lokalisation abhängen.
QIP1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des KPNA4-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von KPNA4 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die KPNA4-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit KPNA4-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.