Partículas Lentivirales de Activación (m) Qa-1: sc-420781-LAC

El gen murino H2-T23 codifica Qa-1, una molécula no clásica del MHC de clase I que presenta un repertorio restringido de péptidos y modula el reconocimiento inmunitario al interactuar con receptores inhibidores y activadores en células NK y en subpoblaciones de linfocitos T CD8. Qa-1 contribuye a la tolerancia inmunitaria y a la vigilancia al moldear las respuestas citotóxicas e influir en la dinámica de presentación de antígenos dentro de la vía más amplia del MHC de clase I. La expresión alterada de Qa-1/H2-T23 se ha asociado con cambios en el tono inflamatorio, el escape inmunitario y la regulación de respuestas autorreactivas, por lo que es relevante para estudios de infección, inmunología tumoral y fenotipos tipo autoinmunes. Como regulador modelo de la presentación de antígenos, Qa-1 se utiliza con frecuencia para investigar la comunicación cruzada NK–T, la señalización inmunitaria inducida por estrés y mecanismos similares a puntos de control inmunitarios en ratón.

Las partículas de activación lentiviral Qa-1 (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de H2-T23 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Qa-1 (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción H2-T23, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de Qa-1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo H2-T23 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.