Plásmido Doble Nickase (h) PYST2: sc-404642-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)PYST2 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa PYST2 (h) y el plásmido de doble nickasa PYST2 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a DUSP7. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: PYST2 Anticuerpo (D-8): sc-377106
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) PYST2 | sc-404642-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) PYST2 | sc-404642-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La fosfatasa de doble especificidad 7 (DUSP7), también conocida como PYST2, es una fosfatasa dirigida a MAPK que desfosforila e inactiva de forma preferente a ERK1/2, modulando la amplitud y la duración de la señalización impulsada por mitógenos. Al proporcionar retroalimentación negativa dentro de la cascada Ras–Raf–MEK–ERK, DUSP7 ayuda a regular la proliferación, la diferenciación y los programas transcripcionales adaptativos al estrés. La expresión o actividad alterada de DUSP7 se ha asociado con una salida desregulada de la vía MAPK en cánceres y otras afecciones en las que la señalización de ERK gobierna decisiones de destino celular, lo que la convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos de la plasticidad de la señalización. En modelos celulares humanos, estudiar la función de DUSP7 puede aclarar cómo la atenuación mediada por fosfatasas influye en efectores aguas abajo, incluidos genes de respuesta inmediata y reguladores del ciclo celular.
PYST2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus DUSP7 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de DUSP7. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de DUSP7. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con DUSP7 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.