Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
pyridoxal phosphatase Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406810
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- pyridoxal phosphatase El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico pyridoxal phosphatase, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: pyridoxal phosphatase Anticuerpo (F-2): sc-271379
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
pyridoxal phosphatase Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-406810 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
PDXP codifica la fosfatasa de piridoxal, una enzima citosólica que hidroliza el piridoxal 5′-fosfato (PLP), la forma activa de la vitamina B6, contribuyendo así al control celular de la disponibilidad de PLP y a la homeostasis de los vitámeros de B6. Dado que el PLP es un cofactor esencial para numerosas aminotransferasas, descarboxilasas y enzimas del metabolismo de un carbono y del metabolismo relacionado con neurotransmisores, la actividad de PDXP puede influir indirectamente en el recambio de aminoácidos y en flujos metabólicos más amplios. A través de su papel en el mantenimiento del equilibrio de cofactores, PDXP es relevante para estudios de adaptación metabólica, vías vinculadas al estado redox y regulación enzima-cofactor. Las alteraciones del metabolismo dependiente de PLP se han implicado en diversos contextos relevantes para enfermedades, lo que convierte a PDXP en una diana útil para investigaciones mecanísticas de fenotipos celulares asociados al metabolismo.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO pyridoxal phosphatase (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PDXP en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PDXP junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PDXP tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína pyridoxal phosphatase.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PDXP para la investigación de la señalización de pyridoxal phosphatase, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de PDXP críticos para la función de pyridoxal phosphatase
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PDXP para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido pyridoxal phosphatase CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido pyridoxal phosphatase CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PDXP. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR pyridoxal phosphatase (h) y el plásmido HDR pyridoxal phosphatase (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PDXP para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PDXP definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.