Plasmide Double Nickase (h) PYK2: sc-400708-NIC

Le gène humain **PTK2B** code la tyrosine kinase non réceptrice **PYK2**, un nœud de signalisation associé aux adhérences focales, activé en aval des intégrines, des récepteurs de facteurs de croissance, des récepteurs de chimiokines et des signaux Ca2+/PKC. PYK2 coordonne des cascades de phosphorylation impliquant les kinases de la famille Src, FAK, MAPK/ERK et PI3K-AKT afin de réguler le remodelage du cytosquelette, le renouvellement des adhérences, la migration et le trafic vésiculaire. Elle contribue également à la signalisation de l’immunité innée et aux réponses inflammatoires, notamment via des voies liées à l’activation des leucocytes et aux réponses microgliales. Une dérégulation de la signalisation PTK2B/PYK2 a été associée à des altérations de la motilité et des programmes de survie cellulaires pertinents en biologie du cancer, ainsi qu’à des liens génétiques et fonctionnels avec la neuroinflammation et les mécanismes des maladies neurodégénératives.

PYK2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PTK2B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PTK2B. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PTK2B. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PTK2B.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.