Pygopus 1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405936

Panoramica

PYGO1 codifica Pygopus 1, un co-attivatore nucleare che collega i complessi trascrizionali β-catenina/TCF alla cromatina nella segnalazione canonica Wnt. Attraverso interazioni con BCL9/9L e con il macchinario di modifica degli istoni, Pygopus 1 sostiene programmi trascrizionali che controllano la specificazione del destino cellulare, la proliferazione e l’omeostasi epiteliale. Gli output Wnt dipendenti da PYGO1 si intrecciano con processi quali il mantenimento di caratteristiche staminali e la differenziazione, e una regolazione alterata di questa via è spesso implicata in stati trascrizionali oncogenici e in disfunzioni dello sviluppo. Queste caratteristiche rendono PYGO1 un bersaglio utile per analizzare l’espressione genica guidata da Wnt e l’interazione con la cromatina in modelli cellulari umani.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Pygopus 1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PYGO1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PYGO1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PYGO1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Pygopus 1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PYGO1 per lo studio della segnalazione di Pygopus 1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PYGO1 critici per la funzione di Pygopus 1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PYGO1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Pygopus 1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Pygopus 1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PYGO1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Pygopus 1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Pygopus 1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PYGO1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PYGO1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.