Pygopus 1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405936
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- Pygopus 1 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico Pygopus 1, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Pygopus 1 Anticuerpo (3E1): sc-517079
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Pygopus 1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-405936 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
PYGO1 codifica Pygopus 1, un coactivador nuclear que acopla los complejos transcripcionales β-catenina/TCF a la cromatina en la señalización Wnt canónica. Mediante interacciones con BCL9/9L y con la maquinaria modificadora de histonas, Pygopus 1 sostiene programas transcripcionales que controlan la especificación del destino celular, la proliferación y la homeostasis epitelial. Las salidas de Wnt dependientes de PYGO1 se entrecruzan con procesos como el mantenimiento de características tipo célula madre y la diferenciación, y la regulación alterada de esta vía se implica con frecuencia en estados transcripcionales oncogénicos y en desregulación del desarrollo. Estas características hacen de PYGO1 un blanco útil para desentrañar la expresión génica impulsada por Wnt y la interacción con la cromatina en modelos celulares humanos.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO Pygopus 1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PYGO1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PYGO1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PYGO1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Pygopus 1.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PYGO1 para la investigación de la señalización de Pygopus 1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de PYGO1 críticos para la función de Pygopus 1
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PYGO1 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido Pygopus 1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Pygopus 1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PYGO1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Pygopus 1 (h) y el plásmido HDR Pygopus 1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PYGO1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PYGO1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.