PYGL Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-430989

Descripción general

El gen *Pygl* de ratón codifica la fosforilasa de glucógeno hepática (PYGL), una enzima limitante de la velocidad que moviliza el glucógeno al catalizar su escisión fosforolítica para generar glucosa-1-fosfato, que luego se utiliza en la glucólisis y contribuye a la homeostasis de la glucosa. La actividad de PYGL coordina la glucogenólisis hepática con señales hormonales y de detección de nutrientes, vinculando la disponibilidad de carbohidratos con el flujo metabólico a través de las rutas centrales del carbono. La alteración de la función de PYGL modifica el almacenamiento y la utilización de glucógeno y es relevante para errores congénitos del metabolismo del glucógeno, por lo que constituye una diana útil para estudiar la adaptación metabólica y el balance energético en hepatocitos y en modelos de organismo completo. Por ello, *Pygl* es ampliamente informativo para la investigación sobre la programación metabólica hepática, las respuestas al ayuno y la regulación a nivel de sistemas del metabolismo de la glucosa.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PYGL (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Pygl en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Pygl junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Pygl tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PYGL.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Pygl para la investigación de la señalización de PYGL, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Pygl críticos para la función de PYGL
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Pygl para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PYGL CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido PYGL CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Pygl. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PYGL (m) y el plásmido HDR PYGL (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Pygl para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Pygl definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.