PXDN CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404707-ACT

Das humane Gen **PXDN** kodiert **Peroxidasin**, eine sekretierte Häm-Peroxidase der extrazellulären Matrix (ECM), die **Sulfilimin-Quervernetzungen** in **Kollagen IV** katalysiert und damit die **Assemblierung der Basalmembran** sowie die **Gewebeintegrität** unterstützt. Über oxidative enzymatische Aktivität und ECM-Remodelling beeinflusst PXDN **Zell–Matrix-Adhäsion**, **Migration** sowie die **Funktion vaskulärer und epithelialer Barrieren**. Eine dysregulierte PXDN-Expression oder -Aktivität wurde mit **Entwicklungs- und okulären Phänotypen** in Verbindung gebracht und in Zusammenhängen wie **Fibrose**, **Entzündung** und dem **Remodelling des Tumormikromilieus** untersucht. Als ECM-assoziiertes Redox-Enzym ist PXDN ein nützlicher Knotenpunkt, um **Basalmembran-Dynamiken** und **oxidative Signalübertragung** in Zell- und Organoidmodellen zu untersuchen.

PXDN Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen PXDN-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

PXDN Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des PXDN-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der PXDN-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen PXDN-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native PXDN-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von PXDN-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des PXDN-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem PXDN-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.