Partículas Lentivirales de Activación (h) PU.1/Spi1: sc-400547-LAC

SPI1 codifica el factor de transcripción PU.1 (Spi1) de la familia ETS, un regulador determinante del linaje de la diferenciación hematopoyética que coordina el desarrollo de las células mieloides y de las células B. PU.1 se une a motivos ETS para controlar programas implicados en la señalización de la inmunidad innata, la presentación de antígenos y la función de los fagocitos, integrando señales de las vías de citocinas/JAK-STAT, NF-κB y receptores tipo Toll. Su actividad, sensible a la dosis, modula la accesibilidad de la cromatina y las redes transcripcionales que gobiernan el compromiso de los progenitores y la maduración de macrófagos, neutrófilos y células dendríticas. La expresión o actividad desregulada de SPI1 se asocia a neoplasias hematológicas y disfunción inmunitaria, lo que lo convierte en un nodo clave para estudiar la circuitería transcripcional leucemogénica y la regulación de genes inflamatorios.

Las partículas de activación lentiviral PU.1/Spi1 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de SPI1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral PU.1/Spi1 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción SPI1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de PU.1/Spi1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo SPI1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.