Plasmide CRISPR/Cas9 KO PTPN21 (h): sc-407466

Présentation

PTPN21 code une phosphatase cytosolique des tyrosines qui module la signalisation dépendante de la phosphorylation en déphosphorylant des substrats spécifiques ainsi que des protéines d’échafaudage. En régulant les sorties des récepteurs à activité tyrosine kinase et les voies en aval contrôlant la dynamique du cytosquelette, l’adhésion et le trafic vésiculaire, PTPN21 peut influencer la motilité cellulaire et l’amplitude des signaux. Son activité s’inscrit à l’interface de réseaux régissant les réponses aux facteurs de croissance et la signalisation du stress, ce qui la rend pertinente pour l’étude de la transformation cellulaire et des phénotypes invasifs. Une signalisation phosphatase dérégulée impliquant PTPN21 a été mise en cause dans des contextes tels que le remodelage de la signalisation associée au cancer et des modifications du comportement migratoire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PTPN21 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PTPN21 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PTPN21, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PTPN21 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PTPN21.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PTPN21 pour l'étude de la signalisation de PTPN21, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PTPN21 essentiels à la fonction de PTPN21
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PTPN21 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PTPN21 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PTPN21 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PTPN21. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PTPN21 plasmide HDR (h) et le PTPN21 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PTPN21 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PTPN21 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.