Partículas Lentivirales de Activación (h) PTP1B: sc-400732-LAC

PTPN1 codifica la fosfatasa de tirosina proteína 1B (PTP1B), una fosfatasa asociada al retículo endoplásmico que desfosforila quinasas receptoras de tirosina activadas y mediadores clave de la señalización. Al atenuar la señalización del receptor de insulina y de IGF1R, PTP1B modula la salida de las vías PI3K–AKT y MAPK, configurando el metabolismo celular, la capacidad de respuesta a factores de crecimiento y la señalización de estrés. PTP1B también influye en la señalización de citocinas y relacionada con JAK/STAT mediante la desfosforilación de sustratos seleccionados, vinculando el recambio de fosfotirosinas con procesos inflamatorios y de regulación inmunitaria. La actividad desregulada de PTPN1/PTP1B se ha implicado en fenotipos metabólicos, en el reconfigurado de la señalización asociada al cáncer y en alteraciones de la señalización inmunitaria, lo que la convierte en un nodo ampliamente utilizado para el análisis de vías.

Las partículas de activación lentiviral PTP1B (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de PTPN1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral PTP1B (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción PTPN1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de PTP1B. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo PTPN1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.