Plasmide Double Nickase (h) PTP1B: sc-400732-NIC

PTPN1 code la protéine tyrosine phosphatase 1B (PTP1B), une phosphatase associée au réticulum endoplasmique qui déphosphoryle les récepteurs tyrosine kinases activés ainsi que des protéines adaptatrices clés. En atténuant la signalisation des récepteurs de l’insuline et de la leptine et en modulant les effets des voies JAK/STAT, MAPK/ERK et PI3K/AKT, PTP1B contribue à réguler le métabolisme cellulaire, la réponse aux facteurs de croissance et la signalisation inflammatoire. Une activité altérée de PTPN1/PTP1B a été associée à une dérégulation de l’homéostasie du glucose et de l’adiposité, et elle est fréquemment étudiée dans le contexte de réseaux de signalisation oncogéniques entraînés par une phosphorylation aberrante des tyrosines. Dans les compartiments immunitaires et stromaux, PTP1B façonne également la dynamique de la signalisation des cytokines, ce qui la rend pertinente pour l’étude des réponses au stress cellulaire et des interactions entre voies de signalisation.

PTP1B Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PTPN1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PTPN1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PTPN1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PTPN1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.