PTP-MEG2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402658-ACT

PTPN9 kodiert die Protein-Tyrosinphosphatase PTP‑MEG2, einen zytosolischen Regulator der Phosphotyrosin-Signalübertragung, der kinasegetriebene Signalwege ausbalanciert, welche den Vesikeltransport, die Sekretion und die rezeptornahe Signaltransduktion steuern. PTP‑MEG2 wird mit der Modulation von Signalausgängen in Immunzellen sowie von wachstumsfaktorabhängigen Prozessen in Verbindung gebracht, indem es Schlüsselsubstrate an Membranen und in sekretorischen Kompartimenten dephosphoryliert. Über diese Aktivitäten beeinflusst PTPN9 Programme der zellulären Homöostase, darunter Adhäsion, Migration und metabolische Signalgebung. Veränderte PTPN9-Expression oder ein veränderter Signalkontext wurden in der Literatur mit fehlregulierter entzündlicher Signalgebung und einer onkogenen Neuverdrahtung von Signalnetzwerken assoziiert, was seine Eignung als mechanistischer Knotenpunkt in signalwegfokussierten Studien unterstreicht.

PTP-MEG2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen PTPN9-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

PTP-MEG2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des PTPN9-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der PTPN9-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen PTP-MEG2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native PTPN9-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von PTP-MEG2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des PTP-MEG2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem PTPN9-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.