Plásmido CRISPR de Activación (h) PTP-MEG2: sc-402658-ACT

PTPN9 codifica la fosfatasa de tirosina proteica PTP‑MEG2, un regulador citosólico de la señalización por fosfotirosina que contrarresta las vías impulsadas por quinasas que controlan el tráfico vesicular, la secreción y la transducción de señales proximal al receptor. Se ha implicado a PTP‑MEG2 en la modulación de las salidas de señalización de las células inmunitarias y de procesos sensibles a factores de crecimiento mediante la desfosforilación de sustratos clave en membranas y compartimentos secretores. A través de estas actividades, PTPN9 influye en programas de homeostasis celular que incluyen la adhesión, la migración y la señalización metabólica. En la literatura, la alteración de la expresión de PTPN9 o del contexto de su señalización se ha asociado con una señalización inflamatoria desregulada y con la reconfiguración de redes oncogénicas, lo que respalda su utilidad como nodo mecanístico en estudios centrados en vías.

PTP-MEG2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PTPN9 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PTP-MEG2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PTPN9 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PTPN9, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PTP-MEG2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PTPN9 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PTP-MEG2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PTP-MEG2 en células tumorales con expresión de PTPN9 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.