Plásmido CRISPR de Activación (h) PTP IA-2β: sc-404896-ACT

PTPRN2 codifica la proteína tipo fosfatasa de tirosina receptora similar PTP IA-2β (también conocida como IA-2β/phogrin), un miembro catalíticamente inactivo de la familia PTP, enriquecido en las membranas de los gránulos secretores de núcleo denso en células neuroendocrinas y de los islotes pancreáticos. Participa en el tráfico vesicular regulado y la exocitosis, e influye en la biogénesis de los gránulos secretores, la dinámica de liberación de hormonas/neuropeptidos y programas de señalización dependientes de la actividad. PTPRN2 se estudia ampliamente en el contexto de los autoantígenos de los islotes y la función de las células endocrinas, con relevancia para el reconocimiento inmunitario y fenotipos de secreción desregulada en la investigación relacionada con la diabetes. Su expresión y sus funciones asociadas a gránulos también lo hacen útil para explorar estados de diferenciación neuroendocrina y la remodelación de la vía secretora.

PTP IA-2β El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PTPRN2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PTP IA-2β El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PTPRN2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PTPRN2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PTP IA-2β. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PTPRN2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PTP IA-2β en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PTP IA-2β en células tumorales con expresión de PTPRN2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.