PTP-H1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-404194

Übersicht

PTPN3 kodiert die nichtrezeptorartige Protein-Tyrosinphosphatase PTP-H1, einen zytosolischen Regulator, der Kinase-Signale ausgleicht, indem er Phosphotyrosinreste auf Rezeptor- und Nichtrezeptor-Substraten dephosphoryliert. Durch die Modulation der Tyrosinphosphorylierungs-Dynamik beeinflusst PTP-H1 Signalwege, die Zellwachstum, Adhäsion und den Umbau des Zytoskeletts steuern, mit nachgeschalteten Effekten auf MAPK- und andere phosphorylierungsabhängige Signalnetzwerke. Eine veränderte Aktivität oder Expression von PTPN3 wurde in krebsassoziierten Kontexten mit fehlregulierter Signaltransduktion sowie mit zellulären Phänotypen in Verbindung gebracht, die mit aberranter Migration und Invasion zusammenhängen. Als Signalknotenpunkt wird PTP-H1 häufig im Hinblick auf seinen Beitrag zur Feinabstimmung onkogener Signalwege und zur kontextabhängigen Kontrolle von Rezeptor-Signalausgängen untersucht.

Das PTP-H1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PTPN3-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PTPN3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PTPN3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PTP-H1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PTPN3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PTP-H1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PTPN3-Exone abzielen, die für die PTP-H1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PTPN3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PTP-H1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom PTP-H1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PTPN3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PTP-H1 HDR-Plasmid (h) und PTP-H1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PTPN3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PTPN3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.