Plásmido CRISPR de Activación (m) PTN: sc-422498-ACT

El gen murino **Ptn** codifica la pleiotrofina (PTN), un factor de crecimiento secretado y de unión a heparina que señaliza a través de proteoglucanos de heparán sulfato y fosfatasas proteicas tirosina receptoras para regular la proliferación, la supervivencia y la migración celular, así como el crecimiento de neuritas. La actividad de PTN se entrecruza con las vías MAPK/ERK, PI3K/AKT y de remodelación del citoesqueleto, que determinan el patrón tisular y la plasticidad durante el desarrollo y la reparación. En el sistema nervioso y en microambientes estromales, la alteración de la expresión de PTN se asocia con cambios en la angiogénesis, la inflamación y las interacciones con la matriz extracelular que influyen en fenotipos relevantes para la enfermedad. Estas propiedades convierten a **Ptn** en una diana útil para estudios mecanísticos del neurodesarrollo, las respuestas a lesiones y la señalización del microambiente en modelos murinos.

PTN El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Ptn sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PTN El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Ptn en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Ptn, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PTN. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Ptn y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PTN en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PTN en células tumorales con expresión de Ptn silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.