PTH Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422490

Descripción general

El gen **Pth** del ratón codifica la **hormona paratiroidea (PTH)**, un péptido secretado que mantiene el equilibrio sistémico de calcio y fosfato mediante señalización a través del **receptor PTH1**, regulando el remodelado óseo, la reabsorción tubular renal y la excreción de fosfato. La señalización de PTH mediada por GPCR activa las vías **cAMP/PKA** y **PLC/PKC**, e influye en el acoplamiento osteoblasto–osteoclasto mediante mediadores posteriores como **RANKL** y **OPG**. En contextos fisiológicos, la expresión de **Pth** integra la retroalimentación del calcio circulante y del metabolismo de la vitamina D para coordinar la homeostasis de los iones minerales. La desregulación de la señalización de PTH es ampliamente relevante para la investigación sobre el recambio esquelético, los trastornos del metabolismo mineral y la regulación endocrina del diálogo entre riñón y hueso.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PTH (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Pth en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Pth junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Pth tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PTH.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Pth para la investigación de la señalización de PTH, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Pth críticos para la función de PTH
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Pth para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PTH CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido PTH CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Pth. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PTH (m) y el plásmido HDR PTH (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Pth para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Pth definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.