PTH CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401280

Übersicht

Parathormon (PTH) ist ein endokrines Peptidhormon, das hauptsächlich von Hauptzellen der Nebenschilddrüsen gebildet wird und durch seine Wirkung an Niere und Knochen die systemische Calcium- und Phosphathomöostase aufrechterhält. Durch Bindung an PTH1R aktiviert PTH die Signalwege Gs/cAMP/PKA und Gq/PLC und moduliert dadurch die Kopplung zwischen Osteoblasten und Osteoklasten sowie die tubuläre Handhabung von Calcium und Phosphat in der Niere, einschließlich der Regulation der Vitamin‑D‑Aktivierung. Die PTH-abhängige Signalübertragung ist mit Netzwerken des Mineralstoffwechsels wie den FGF23‑Klotho‑Signalwegen verknüpft und beeinflusst nachgeschaltete Transkriptionsprogramme in Skelett- und Nierenzelltypen. Eine dysregulierte PTH-Expression oder -Signalübertragung ist mit Störungen des Mineralionengleichgewichts und des Knochenumbaus assoziiert und bietet damit einen nützlichen Ansatzpunkt für mechanistische Studien in Modellen der Endokrinologie, Skelettbiologie und Nephrologie.

Das PTH CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PTH-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PTH-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PTH nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PTH-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PTH-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PTH-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PTH-Exone abzielen, die für die PTH-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PTH-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PTH CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom PTH CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PTH-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PTH HDR-Plasmid (h) und PTH HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PTH-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PTH-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.