PTH Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401280-ACT

O PTH humano codifica o hormônio da paratireoide, um peptídeo endócrino que mantém a homeostase de cálcio e fosfato ao atuar sobre o osso e o rim e ao coordenar-se com o metabolismo da vitamina D. A sinalização do PTH envolve vias dependentes do PTH1R, como cAMP/PKA e PLC, para modular o acoplamento entre osteoblastos e osteoclastos, a reabsorção tubular renal e o manejo do fosfato, integrando o equilíbrio mineral sistêmico à remodelação esquelética. A desregulação da expressão ou secreção de PTH está associada a alterações no metabolismo mineral e no turnover ósseo, incluindo fenótipos relacionados a hiperparatireoidismo e hipoparatireoidismo, tornando o PTH um nó central para o estudo do controle endócrino da fisiologia musculoesquelética.

PTH O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PTH sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PTH O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PTH em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PTH, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PTH. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PTH nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PTH no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PTH em células tumorais com expressão de PTH silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.