Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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PSPH Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403897
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- PSPH El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico PSPH, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: PSPH Anticuerpo (H-10): sc-271421
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
PSPH Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-403897 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
La fosfoserina fosfatasa (PSPH) cataliza el paso final de la vía de biosíntesis de serina fosforilada, convirtiendo la O‑fosfo‑L‑serina en L‑serina y fosfato inorgánico. Al controlar la disponibilidad intracelular de serina, PSPH sostiene el metabolismo de un carbono y la síntesis de nucleótidos, el equilibrio redox mediante la producción de glutatión y la síntesis de lípidos, vinculando el metabolismo de los aminoácidos con programas proliferativos y de respuesta al estrés. La actividad de PSPH se integra con la reprogramación metabólica observada en células de rápida división y con frecuencia se examina junto con PHGDH y PSAT1 dentro del eje serina–glicina. La expresión desregulada de PSPH se ha asociado con fenotipos metabólicos alterados en cáncer y otros trastornos caracterizados por alteraciones del metabolismo de aminoácidos y de un carbono, lo que la hace relevante para estudios mecanísticos de vulnerabilidad metabólica.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO PSPH (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PSPH en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PSPH junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PSPH tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PSPH.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PSPH para la investigación de la señalización de PSPH, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de PSPH críticos para la función de PSPH
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PSPH para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido PSPH CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido PSPH CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PSPH. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PSPH (h) y el plásmido HDR PSPH (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PSPH para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PSPH definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.