Plásmido CRISPR de Activación (h) Psoriasin: sc-418211-ACT

S100A7 codifica la psoriasina, una proteína de la familia S100 que se une al calcio, enriquecida en epitelios estratificados e inducida durante el estrés inflamatorio. La psoriasina contribuye a la diferenciación epitelial, la defensa de la barrera y la señalización inmunitaria innata, y puede actuar como mediador asociado al daño que modula el reclutamiento de leucocitos y las redes locales de citocinas. Se ha vinculado con la hiperproliferación de queratinocitos y con programas inflamatorios característicos de la psoriasis y de otros estados inflamatorios epiteliales, y su desregulación se ha descrito en múltiples contextos de carcinoma, donde se asocia con alteraciones en la migración celular y en las interacciones entre el tumor y el microambiente. Estas propiedades hacen de S100A7 un nodo útil para estudiar la comunicación epitelio–inmunidad, los programas transcripcionales sensibles al estrés y los procesos de señalización dependientes de calcio.

Psoriasin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de S100A7 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Psoriasin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus S100A7 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional S100A7, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Psoriasin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo S100A7 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Psoriasin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Psoriasin en células tumorales con expresión de S100A7 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.