PSMD3 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-405946-ACT

PSMD3 kodiert eine nicht-ATPase Untereinheit des 19S-Regulatorpartikels des 26S-Proteasoms und trägt zur ubiquitinabhängigen Erkennung und Verarbeitung von Proteinen vor deren Abbau bei. Durch die Unterstützung der Proteasomfunktion beeinflusst PSMD3 die zelluläre Proteostase, den Zellzyklusverlauf, Stressantworten und Antigenverarbeitungswege, die vom regulierten Umsatz zentraler Signalproteine abhängen. Eine dysregulierte Proteasomaktivität und veränderte PSMD3-Expression wurden in verschiedenen Kontexten mit aberranter inflammatorischer Signalübertragung und onkogenen Programmen in Verbindung gebracht, was die zentrale Rolle des Proteasoms bei der Kontrolle der Stabilität von Transkriptionsfaktoren und Checkpoint-Proteinen widerspiegelt. Daher ist PSMD3 ein nützliches Ziel für mechanistische Studien zur Dynamik des Ubiquitin-Proteasom-Systems und zur nachgeschalteten Umprogrammierung von Signalwegen.

PSMD3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen PSMD3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

PSMD3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des PSMD3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der PSMD3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen PSMD3-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native PSMD3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von PSMD3-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des PSMD3-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem PSMD3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.