PSMD3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405946-ACT

PSMD3は、26Sプロテアソームの19S制御粒子を構成する非ATPaseサブユニットをコードしており、分解に先立つユビキチン依存的なタンパク質認識および処理に寄与します。プロテアソーム機能を支えることで、PSMD3は細胞内プロテオスタシス、細胞周期の進行、ストレス応答、ならびに主要シグナルタンパク質の制御されたターンオーバーに依存する抗原プロセシング経路に影響を与えます。プロテアソーム活性の破綻やPSMD3発現の変化は、複数の状況において異常な炎症シグナルやがん化プログラムと関連づけられており、これは転写因子やチェックポイントタンパク質の安定性制御におけるプロテアソームの中心的役割を反映しています。そのためPSMD3は、ユビキチン–プロテアソーム系の動態と、それに伴う下流経路の再配線を機構的に解析するうえで有用な標的です。

PSMD3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PSMD3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PSMD3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PSMD3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPSMD3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PSMD3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPSMD3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPSMD3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPSMD3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPSMD3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。