Plásmido CRISPR de Activación (h) PSMC2: sc-405022-ACT

PSMC2 codifica la subunidad reguladora 7 del proteasoma 26S (Rpt1), una ATPasa AAA+ dentro de la partícula reguladora 19S que impulsa el desplegado de sustratos y su translocación al núcleo 20S para la degradación de proteínas dependiente de ubiquitina. Mediante el control de la proteostasis, PSMC2 influye en la progresión del ciclo celular, las respuestas al daño del ADN, la señalización de estrés y el procesamiento de antígenos, integrándose con vías como el recambio ubiquitina–proteasoma, la regulación de NF-κB y la adaptación al estrés proteotóxico. La actividad alterada del proteasoma y la expresión de subunidades reguladoras se asocian con frecuencia a fenotipos proliferativos y a un control de puntos de control desregulado observado en diversos contextos patológicos, lo que convierte a PSMC2 en un nodo útil para estudiar el control de calidad proteico y la remodelación de redes reguladoras. Por lo tanto, la perturbación de los niveles de PSMC2 puede ayudar a investigar cómo las funciones del proteasoma dependientes de ATP configuran programas transcripcionales y la aptitud celular.

PSMC2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PSMC2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PSMC2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PSMC2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PSMC2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PSMC2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PSMC2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PSMC2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PSMC2 en células tumorales con expresión de PSMC2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.