PSK2 Double Nickase Plasmid (h2): sc-418247-NIC-2
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das PSK2 Double Nickase Plasmid (h2) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- PSK2 Double-Nickase-Plasmid (h2) und PSK2 Double-Nickase-Plasmid (h22) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf TAOK1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: PSK2: sc-136094
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| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
PSK2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-418247-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Humanes TAOK1 (TAO-Kinase 1), auch als PSK2 bezeichnet, kodiert eine Serin/Threonin-Kinase, die stromaufwärts der MAPK-Signalübertragung wirkt, insbesondere der stressaktivierten p38- und JNK-Kaskaden, um Zytoskelettdynamik, Zentrosomenorganisation und mikrotubuliabhängige Prozesse zu koordinieren, die für Mitose und neuronale Entwicklung wichtig sind. Die TAOK1-Aktivität integriert Signale aus zellulären Stress- und Polaritätswegen und beeinflusst Phosphorylierungsnetzwerke, die Apoptose, Migration und Neuritenauswachsung regulieren. Genetische und funktionelle Studien haben eine Fehlregulation von TAOK1 mit neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen und einer krebsassoziierten Umverdrahtung von Signalwegen in Verbindung gebracht, was seine Relevanz für Modelle einer veränderten MAPK-Kontrolle und eines durch das Zytoskelett getriebenen Zellverhaltens unterstreicht. Die Geneditierung von TAOK1 ermöglicht die mechanistische Untersuchung kinaseabhängiger Signalweg-Kreuzregulation, die Kartierung von Phosphorylierungssubstraten sowie die Erzeugung isogener humaner Zellsysteme, um Genotyp-Phänotyp-Beziehungen in krankheitsrelevanten Kontexten zu erforschen.
PSK2 Das Double-Nickase-Plasmid (h2) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des TAOK1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von TAOK1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die TAOK1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit TAOK1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.