Psf3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406717

Descripción general

GINS3 codifica Psf3, una subunidad central del complejo GINS heterotetramérico que coopera con CDC45 y la helicasa MCM2–7 para formar la helicasa replicativa CMG, necesaria para la activación de los orígenes y la replicación del ADN de manera procesiva. Al favorecer la progresión de la horquilla de replicación y la coordinación con la señalización del punto de control de la fase S, Psf3 ayuda a mantener la estabilidad del genoma durante el tránsito del ciclo celular. La alteración de la actividad del complejo GINS se asocia con estrés replicativo, cambios en la capacidad proliferativa y respuestas al daño del ADN, aspectos que con frecuencia se aprovechan en estudios de transformación oncogénica. Como factor de replicación con expresión regulada por el ciclo celular, GINS3 se utiliza ampliamente como punto de entrada molecular para investigar la dinámica de la replicación, el ensamblaje del replisoma asociado a la cromatina y las vías que protegen la integridad del ADN.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Psf3 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen GINS3 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del GINS3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de GINS3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Psf3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en GINS3 para la investigación de la señalización de Psf3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de GINS3 críticos para la función de Psf3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de GINS3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Psf3 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Psf3 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus GINS3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Psf3 (h) y el plásmido HDR Psf3 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología GINS3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana GINS3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.