PSF Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-427964

Panoramica

Sfpq codifica il fattore di splicing PSF (proteina ricca in prolina e glutammina), un regolatore multifunzionale in grado di legare RNA e DNA che coordina lo splicing del pre‑mRNA, il controllo trascrizionale e la biologia dei paraspeckle nucleari attraverso interazioni con lunghi RNA non codificanti come NEAT1. Nelle cellule murine, PSF contribuisce alla fedeltà del processamento dell’RNA, alle decisioni di splicing alternativo e all’accoppiamento tra trascrizione e maturazione dell’RNA, partecipando anche a processi di mantenimento del genoma legati alle risposte al danno al DNA. Attraverso queste attività, Sfpq influenza ampi programmi di espressione genica che interessano il controllo del ciclo cellulare, la differenziazione neuronale e la segnalazione adattativa allo stress. La deregolazione della funzione di SFPQ/PSF e la sua mislocalizzazione sono state associate ad alterazioni del metabolismo dell’RNA e a fenotipi rilevanti per la neurodegenerazione, rendendolo un bersaglio utile per studi meccanicistici sulle reti di proteine leganti l’RNA.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PSF (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Sfpq in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Sfpq insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Sfpq a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PSF.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Sfpq per lo studio della segnalazione di PSF, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Sfpq critici per la funzione di PSF
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Sfpq per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PSF CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal PSF CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Sfpq. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PSF Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR PSF (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Sfpq per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Sfpq definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.