PSF Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-427964

Descripción general

Sfpq codifica el factor de empalme PSF (proteína rica en prolina y glutamina), un regulador multifuncional que se une a ARN y ADN y coordina el empalme del pre-ARNm, el control transcripcional y la biología de los paraspeckles nucleares mediante interacciones con ARN largos no codificantes como NEAT1. En células de ratón, PSF contribuye a la fidelidad del procesamiento del ARN, a las decisiones de empalme alternativo y al acoplamiento entre la transcripción y la maduración del ARN, además de participar en procesos de mantenimiento del genoma vinculados a respuestas al daño del ADN. A través de estas actividades, Sfpq influye en amplios programas de expresión génica que afectan el control del ciclo celular, la diferenciación neuronal y la señalización adaptativa al estrés. La desregulación de la función de SFPQ/PSF y su deslocalización se han asociado con alteraciones del metabolismo del ARN y fenotipos relevantes para la neurodegeneración, lo que lo convierte en una diana útil para estudios mecanísticos de redes de proteínas de unión a ARN.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PSF (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Sfpq en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Sfpq junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Sfpq tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PSF.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Sfpq para la investigación de la señalización de PSF, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Sfpq críticos para la función de PSF
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Sfpq para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PSF CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido PSF CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Sfpq. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PSF (m) y el plásmido HDR PSF (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Sfpq para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Sfpq definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.