Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
pS2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402867
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- pS2 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico pS2, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: pS2 Anticuerpo (A-10): sc-271464
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
pS2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-402867 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
TFF1, también conocido como pS2, codifica un factor trébol secretado que contribuye a la integridad de la barrera epitelial y a la reparación de la mucosa al promover la migración celular y regular la restitución tras una lesión. En tejidos humanos se expresa de manera destacada en el epitelio gástrico y mamario, y con frecuencia está regulado por programas transcripcionales sensibles a hormonas, lo que lo vincula con la diferenciación y con fenotipos de epitelio luminal. pS2 participa en señales asociadas al estrés y a la inflamación que influyen en la homeostasis epitelial, incluidas interacciones con mucinas y la modulación de respuestas relacionadas con factores de crecimiento. La expresión desregulada de TFF1 se utiliza a menudo como lectura molecular en estudios de metaplasia gastrointestinal y de la biología del cáncer de mama con receptor de estrógeno positivo, donde puede reflejar cambios en el estado epitelial y en la señalización del microambiente.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO pS2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen TFF1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del TFF1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de TFF1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína pS2.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en TFF1 para la investigación de la señalización de pS2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de TFF1 críticos para la función de pS2
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de TFF1 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido pS2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido pS2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus TFF1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR pS2 (h) y el plásmido HDR pS2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología TFF1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana TFF1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.