PRX IV Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-424704

Visão geral

Prdx4 codifica a peroxirredoxina IV (PRX IV), uma peroxidase dependente de tiol localizada no retículo endoplasmático, que reduz o peróxido de hidrogénio e hidroperóxidos orgânicos para manter a homeostase redox em células secretoras e produtoras de proteínas de membrana. No lúmen do RE, a PRX IV ajuda a moldar a dobragem oxidativa de proteínas ao acoplar a desintoxicação de peróxidos à formação de pontes dissulfureto, influenciando a proteostase e a sinalização da resposta a proteínas mal dobradas (UPR) durante o stress do RE. Ao controlar as espécies reativas de oxigénio locais, a PRX IV pode modular vias sensíveis ao estado redox que afetam a inflamação, a sobrevivência celular e a adaptação metabólica. O desequilíbrio redox do RE e a atividade da PRX IV desregulada têm sido associados a fenótipos ligados ao stress oxidativo relevantes para a biologia do cancro, doenças metabólicas e processos inflamatórios, tornando o Prdx4 um alvo útil para estudos mecanísticos em modelos murinos.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO PRX IV (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Prdx4 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Prdx4, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Prdx4 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína PRX IV.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Prdx4 para a investigação da sinalização de PRX IV, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Prdx4 críticos para a função PRX IV
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Prdx4 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo PRX IV Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo PRX IV Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Prdx4. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo PRX IV Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR PRX IV (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Prdx4 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Prdx4 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.