Plasmide CRISPR/Cas9 KO PRX IV (m): sc-424704

Présentation

Prdx4 code la peroxyrédoxine IV (PRX IV), une peroxydase thiol‑dépendante localisée au réticulum endoplasmique (RE) qui réduit le peroxyde d’hydrogène et les hydroperoxydes organiques afin de maintenir l’homéostasie rédox dans les cellules productrices de protéines sécrétées et membranaires. Dans la lumière du RE, PRX IV contribue au repliement oxydatif des protéines en couplant la détoxification des peroxydes à la formation de ponts disulfure, influençant ainsi la protéostasie et la signalisation de la réponse aux protéines mal repliées (UPR) lors du stress du RE. En contrôlant localement les espèces réactives de l’oxygène, PRX IV peut moduler des voies sensibles au statut rédox qui affectent l’inflammation, la survie cellulaire et l’adaptation métabolique. Un déséquilibre rédox du RE et une activité dérégulée de PRX IV ont été associés à des phénotypes liés au stress oxydant, pertinents pour la biologie des cancers, les maladies métaboliques et les processus inflammatoires, faisant de Prdx4 une cible utile pour des études mécanistiques dans des modèles murins.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PRX IV (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Prdx4 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Prdx4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Prdx4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PRX IV.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Prdx4 pour l'étude de la signalisation de PRX IV, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Prdx4 essentiels à la fonction de PRX IV
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Prdx4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PRX IV plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le PRX IV plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Prdx4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PRX IV plasmide HDR (m) et le PRX IV (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Prdx4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Prdx4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.