PRX IV Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402821-ACT

A peroxirredoxina 4 (PRDX4; PRX IV) é uma peroxidase dependente de tióis localizada principalmente no retículo endoplasmático e na via secretória, onde catalisa a redução do peróxido de hidrogénio e de hidroperóxidos orgânicos para manter a homeostase redox. Ao acoplar a desintoxicação de peróxidos ao dobramento oxidativo de proteínas, a PRX IV integra-se nas respostas ao stress do RE e na sinalização da resposta a proteínas mal dobradas (UPR), influenciando a proteostase, a secreção e a sobrevivência celular em condições oxidativas. Alterações na atividade da PRDX4 têm sido associadas a uma sinalização redox desregulada em inflamação e stress metabólico, e é frequentemente estudada em contextos em que o stress oxidativo molda a biologia tumoral, a função de células imunitárias e a fisiologia de tecidos secretórios. Como regulador redox, a PRX IV também se cruza com nós de sinalização mediados por peróxidos que modulam vias de cinases e programas transcricionais ligados à adaptação celular.

PRX IV O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PRDX4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PRX IV O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PRDX4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PRDX4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PRX IV. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PRDX4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PRX IV no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PRX IV em células tumorais com expressão de PRDX4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.