Plásmido CRISPR de Activación (h) PRX IV: sc-402821-ACT

La peroxirredoxina 4 (PRDX4; PRX IV) es una peroxidasa dependiente de tioles localizada principalmente en el retículo endoplásmico y en la vía secretora, donde cataliza la reducción del peróxido de hidrógeno y de los hidroperóxidos orgánicos para mantener la homeostasis redox. Al acoplar la detoxificación de peróxidos con el plegamiento oxidativo de proteínas, PRX IV se integra con las respuestas al estrés del RE y con la señalización de la respuesta a proteínas mal plegadas (UPR), influyendo en la proteostasis, la secreción y la supervivencia celular en condiciones oxidativas. La actividad alterada de PRDX4 se ha asociado con una señalización redox desregulada en la inflamación y el estrés metabólico, y se estudia con frecuencia en contextos en los que el estrés oxidativo determina la biología tumoral, la función de las células inmunitarias y la fisiología de tejidos secretores. Como regulador redox, PRX IV también interactúa con nodos de señalización mediados por peróxidos que modulan vías de quinasas y programas transcripcionales vinculados a la adaptación celular.

PRX IV El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PRDX4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PRX IV El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PRDX4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PRDX4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PRX IV. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PRDX4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PRX IV en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PRX IV en células tumorales con expresión de PRDX4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.