Plasmide CRISPR/Cas9 KO PRX III (h): sc-401730

Présentation

PRDX3 code la peroxyrédoxine III (PRX III), une peroxydase dépendante de la thioredoxine, localisée dans les mitochondries, qui détoxifie le peroxyde d’hydrogène et les hydroperoxydes lipidiques afin de préserver l’équilibre rédox. En tamponnant les espèces réactives de l’oxygène (ROS) mitochondriales, PRX III soutient la phosphorylation oxydative, limite les dommages oxydatifs à l’ADN mitochondrial et aux protéines, et influence la signalisation sensible au rédox ainsi que l’apoptose. L’activité de PRDX3 s’articule avec des systèmes antioxydants mitochondriaux tels que la thioredoxine 2/la thioredoxine réductase et contribue au maintien de l’intégrité mitochondriale en conditions de stress métabolique et inflammatoire. Des altérations de l’expression ou de la fonction de PRDX3 ont été associées à des phénotypes de stress oxydatif et sont étudiées dans le contexte de troubles impliquant une dérégulation du rédox mitochondrial, des voies de signalisation de survie cellulaire et une reprogrammation métabolique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PRX III (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PRDX3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PRDX3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PRDX3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PRX III.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PRDX3 pour l'étude de la signalisation de PRX III, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PRDX3 essentiels à la fonction de PRX III
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PRDX3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PRX III plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PRX III plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PRDX3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PRX III plasmide HDR (h) et le PRX III (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PRDX3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PRDX3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.