Plásmido CRISPR de Activación (h) PRPS2: sc-404095-ACT

PRPS2 codifica la fosforribosil pirofosfato sintetasa 2, una enzima citosólica que produce fosforribosil pirofosfato (PRPP), un sustrato esencial para la biosíntesis de nucleótidos tanto de novo como por vías de rescate. Al controlar la disponibilidad de PRPP, PRPS2 contribuye a regular la producción de purinas y pirimidinas, apoyando la síntesis de ADN/ARN y el flujo metabólico a través de programas biosintéticos vinculados al fosfato de ribosa y al metabolismo de un carbono. La actividad de PRPS2 está estrechamente ligada a la capacidad proliferativa y a las respuestas celulares a señales de nutrientes y de estrés, influyendo en la homeostasis de nucleótidos, la dinámica de replicación y la salida transcripcional. La desregulación del metabolismo de nucleótidos dependiente de PRPS2 se ha asociado con contextos de enfermedad proliferativa y metabólica, lo que la convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos de reconfiguración de vías.

PRPS2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PRPS2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PRPS2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PRPS2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PRPS2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PRPS2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PRPS2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PRPS2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PRPS2 en células tumorales con expresión de PRPS2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.