Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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PrP Plasmide Double Nickase (h): sc-401061-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PrP Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il PrP Double Nickase Plasmid (h) e il PrP Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira PRNP. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PrP Antibody (G-12): sc-398451
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PrP Plasmide Double Nickase (h) | sc-401061-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PrP Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401061-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene umano **PRNP** codifica la proteina prionica **PrP**, una proteina di superficie cellulare ancorata tramite glicosilfosfatidilinositolo (GPI), arricchita nel sistema nervoso e implicata nella funzione sinaptica, nel legame con il rame e nelle risposte cellulari allo stress. PrP va incontro a un traffico endocitico costitutivo e a processi di maturazione lungo le vie secretorie ed endolisosomiali, intersecandosi con reti di proteostasi che includono il sistema ubiquitina–proteasoma e l’autofagia. Il ripiegamento errato e la conversione conformazionale di PrP sono centrali nella biologia dei prioni e sono associati a fenotipi neurodegenerativi caratterizzati da aggregazione proteica e disfunzione neuronale. PRNP è pertanto ampiamente studiato in modelli di misfolding proteico, segnalazione nei microdomini di membrana e fattori dell’ospite che influenzano la suscettibilità alla propagazione di tipo prionico.
PrP Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PRNP nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PRNP. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PRNP. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PRNP interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.