Protein C Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405598

Descripción general

PROC codifica la proteína C, un zimógeno de serina proteasa dependiente de vitamina K sintetizado en el hígado que circula como un regulador clave de la hemostasia. Tras su activación en la superficie endotelial por el complejo trombina–trombomodulina, la proteína C activada inactiva proteolíticamente los cofactores de la coagulación Va y VIIIa, limitando así la generación de trombina. Esta vía anticoagulante se coordina con el receptor endotelial de la proteína C (EPCR) y la proteína S, vinculando el control de la coagulación con la inflamación vascular y la función de barrera. La alteración de la expresión o la función de PROC se asocia con una homeostasis de la coagulación desregulada y fenotipos de enfermedad trombótica, lo que respalda su uso en estudios mecanísticos de la señalización de la coagulación y la biología endotelial.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Protein C (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PROC en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PROC junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PROC tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Protein C.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PROC para la investigación de la señalización de Protein C, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de PROC críticos para la función de Protein C
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PROC para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Protein C CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Protein C CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PROC. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Protein C (h) y el plásmido HDR Protein C (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PROC para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PROC definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.