protein 4.2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406824

Descripción general

EPB42 codifica la proteína 4.2 de la membrana eritrocitaria, un adaptador del citoesqueleto que estabiliza la membrana del glóbulo rojo al acoplar el complejo de la banda 3 (SLC4A1) a las redes de unión espectrina–actina. La proteína 4.2 favorece la cohesión de la membrana, la forma bicóncava de la célula y la resiliencia mecánica durante el tránsito por la microvasculatura, integrándose en vías que regulan la organización de la membrana y la homeostasis del transporte iónico. La alteración de EPB42 perturba la integridad de la membrana eritrocitaria y se asocia con fenotipos de fragilidad de los glóbulos rojos observados en trastornos hemolíticos hereditarios, aportando un vínculo mecanístico entre el ensamblaje del citoesqueleto y la fisiopatología relacionada con la hemólisis. Por ello, este gen se utiliza ampliamente para investigar las interacciones membrana–citoesqueleto, la estequiometría de complejos proteicos y las respuestas al estrés en la biología eritroide.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO protein 4.2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen EPB42 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del EPB42 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de EPB42 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína protein 4.2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en EPB42 para la investigación de la señalización de protein 4.2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de EPB42 críticos para la función de protein 4.2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de EPB42 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido protein 4.2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido protein 4.2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus EPB42. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR protein 4.2 (h) y el plásmido HDR protein 4.2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología EPB42 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana EPB42 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.