Plasmide CRISPR d'Activation (h) Protamine 2: sc-402337-ACT

PRM2 code la protamine 2, une protéine de liaison à l’ADN, spécifique des spermatozoïdes et riche en arginine, qui remplace les histones au cours des stades tardifs de la spermiogenèse afin de favoriser la condensation de la chromatine et la compaction du noyau. Cette transition constitue un élément clé de la différenciation des spermatides et du conditionnement du génome, influençant la morphologie de la tête du spermatozoïde, l’intégrité de l’ADN et l’organisation épigénétique dans la lignée germinale mâle. Une expression altérée de PRM2 ou un déséquilibre des protamines est associé à un remodelage défectueux de la chromatine, à une augmentation de la fragmentation de l’ADN et à une altération des paramètres du sperme, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la biologie de la reproduction masculine et des mécanismes liés à l’infertilité. PRM2 est fréquemment évalué aux côtés d’autres facteurs de remodelage de la chromatine afin d’explorer le contrôle moléculaire de la spermiogenèse et de la maturation des cellules germinales.

Protamine 2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PRM2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Protamine 2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PRM2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PRM2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Protamine 2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PRM2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Protamine 2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Protamine 2 dans les cellules tumorales présentant une expression de PRM2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.