Plásmido Doble Nickase (h) Prostein: sc-406577-NIC

SLC45A3 codifica la proteína prostein, una proteína de membrana multipaso enriquecida en la próstata que se localiza predominantemente en el aparato de Golgi y contribuye a procesos de secreción y tráfico epitelial. Su expresión está regulada por la señalización del receptor de andrógenos y se utiliza comúnmente como marcador molecular del linaje prostático y del estado de diferenciación. Se han descrito patrones alterados de expresión de SLC45A3 y reordenamientos génicos recurrentes que involucran el locus SLC45A3 en la biología del cáncer de próstata, lo que respalda su utilidad para estudiar programas transcripcionales sensibles a andrógenos. La perturbación funcional de prostein ofrece una vía accesible para investigar el tráfico de membranas, la homeostasis del Golgi y las redes reguladoras asociadas al linaje en sistemas modelo humanos derivados de próstata.

Prostein El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus SLC45A3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de SLC45A3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de SLC45A3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con SLC45A3 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.