Plásmido CRISPR de Activación (h) Progesterone Receptor: sc-400198-ACT

PGR codifica el receptor humano de progesterona, un receptor nuclear de hormonas activado por ligando que actúa como factor de transcripción para coordinar programas génicos dependientes de la progesterona. Tras la unión de la hormona, PGR regula la accesibilidad de la cromatina y las redes transcripcionales que controlan el desarrollo de tejidos reproductivos, la progresión del ciclo celular, la diferenciación y la señalización inflamatoria, mediante interacción con co-reguladores de receptores esteroideos y con las vías MAPK/PI3K. La actividad específica de las isoformas (PR-A y PR-B) determina respuestas dependientes del contexto en endometrio, mama y ovario, influyendo en la comunicación epitelio–estroma y en la sensibilidad hormonal. La desregulación de la señalización de PGR y los cambios en la expresión del receptor se estudian con frecuencia en cánceres sensibles a hormonas y en trastornos reproductivos, donde afectan a la proliferación, la invasión y los mecanismos de resistencia endocrina.

Progesterone Receptor El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PGR sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Progesterone Receptor El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PGR en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PGR, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Progesterone Receptor. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PGR y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Progesterone Receptor en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Progesterone Receptor en células tumorales con expresión de PGR silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.