Profilin-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402070-ACT

PFN1 codifica a profilina-1, uma proteína conservada de ligação à actina que regula a disponibilidade de monômeros de actina e promove uma polimerização controlada da actina, moldando a dinâmica do citoesqueleto, a formação de ondulações de membrana (membrane ruffling) e a motilidade celular. A profilina-1 interage com ligantes ricos em prolina e com a sinalização por fosfoinositídeos, conectando o remodelamento de actina a vias que governam endocitose, adesão e mecanotransdução. Devido ao seu papel central na organização do citoesqueleto, PFN1 é frequentemente estudado em contextos de integridade neuronal, migração e respostas ao estresse. Alterações na expressão ou na função de PFN1 têm sido associadas a uma dinâmica de actina desregulada observada em fenótipos celulares relacionados a neurodegeneração e câncer, tornando-o um alvo útil para investigações focadas em vias.

Profilin-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PFN1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Profilin-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PFN1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PFN1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Profilin-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PFN1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Profilin-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Profilin-1 em células tumorais com expressão de PFN1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.