Plasmide CRISPR d'Activation (h) PRMT7: sc-417516-ACT

PRMT7 (protéine arginine méthyltransférase 7) est une PRMT de type III qui catalyse la monométhylation de résidus d’arginine sur les histones et des substrats non histoniques, modulant l’accessibilité de la chromatine et les interactions protéine–protéine. En régulant des programmes transcriptionnels, des processus associés à l’ARN et les réponses au stress cellulaire, PRMT7 contribue au contrôle de la prolifération, de la différenciation et de la signalisation liée aux dommages de l’ADN. Une activité altérée de PRMT7 a été associée à des états épigénétiques dérégulés et à un remodelage des voies observés dans de multiples contextes pathologiques, notamment la reprogrammation transcriptionnelle associée au cancer. En tant que méthyltransférase à l’interface de la chromatine et des réseaux de régulation, PRMT7 est fréquemment étudiée dans les mécanismes de contrôle de l’expression génique et des phénotypes dépendants de l’épigénome.

PRMT7 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PRMT7 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PRMT7 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PRMT7 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PRMT7, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PRMT7. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PRMT7 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PRMT7 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PRMT7 dans les cellules tumorales présentant une expression de PRMT7 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.