Plasmide CRISPR d'Activation (h) PRMT5: sc-401115-ACT

PRMT5 (protéine arginine méthyltransférase 5) est une arginine méthyltransférase de type II qui catalyse la diméthylation symétrique de résidus d’arginine sur les histones ainsi que sur divers substrats non histoniques, contribuant à façonner la structure de la chromatine et les programmes transcriptionnels. Par ses interactions avec des cofacteurs tels que WDR77/MEP50, PRMT5 influence l’épissage de l’ARN, la biogenèse des ribosomes, les réponses aux dommages de l’ADN et le contrôle du cycle cellulaire, reliant la régulation épigénétique à la protéostase et au maintien du génome. L’activité de PRMT5 s’inscrit à l’interface de voies contrôlant la différenciation et la signalisation du stress, et sa dérégulation a été associée à des états transcriptionnels altérés observés dans de multiples cancers ainsi que dans des contextes de perturbations neurodéveloppementales et immunitaires.

PRMT5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PRMT5 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PRMT5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PRMT5 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PRMT5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PRMT5. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PRMT5 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PRMT5 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PRMT5 dans les cellules tumorales présentant une expression de PRMT5 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.