Partículas Lentivirales de Activación (h) PRL-R: sc-400814-LAC

PRLR codifica el receptor de prolactina (PRL‑R), un receptor de citocinas de clase I que se une a la prolactina para regular la diferenciación epitelial, la señalización lactogénica y la homeostasis tisular en múltiples órganos. La dimerización del receptor inducida por el ligando activa JAK2/STAT5, así como las vías PI3K/AKT y MAPK/ERK, coordinando programas transcripcionales vinculados a la proliferación, la supervivencia y la expresión génica sensible a hormonas. La señalización de PRLR se estudia ampliamente en el contexto de la regulación endocrina y la modulación inmunitaria, y la desregulación de la actividad de la vía PRL‑R se ha asociado con alteraciones del control del crecimiento y fenotipos oncogénicos en tejidos sensibles a hormonas. Como resultado, PRLR se analiza con frecuencia como un nodo que conecta la señalización de receptores de citocinas con salidas transcripcionales dependientes del contexto y comportamientos celulares relevantes para la enfermedad.

Las partículas de activación lentiviral PRL-R (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de PRLR en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral PRL-R (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción PRLR, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de PRL-R. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo PRLR y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.