Plásmido Doble Nickase (h) PRL-3: sc-402331-NIC

PTP4A3 codifica la fosfatasa humana PRL-3 (PTP4A3), una fosfatasa de tirosina prenilada que regula redes de señalización que controlan la migración y la adhesión celular, así como la remodelación del citoesqueleto. PRL-3 influye en vías dependientes de fosforilación vinculadas al recambio de adhesiones focales y a la señalización de pequeñas GTPasas, favoreciendo cambios en la polaridad celular y el comportamiento invasivo. La desregulación de la expresión de PTP4A3 se ha asociado con fenotipos proliferativos y migratorios alterados en múltiples contextos tumorales, y con frecuencia se estudia como un modulador de la progresión metastásica. Como diana de investigación, PRL-3 ofrece un nodo abordable para analizar cómo las fosfatasas reconfiguran la señalización mediada por quinasas y las respuestas al microambiente.

PRL-3 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus PTP4A3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de PTP4A3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de PTP4A3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con PTP4A3 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.