PRK2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-430934
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- PRK2 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico PRK2, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: PRK2 Anticuerpo (A-3): sc-271971
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
PRK2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-430934 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
El gen murino *Pkn2* codifica la proteína quinasa 2 relacionada con la proteína quinasa C (PRK2), una quinasa de serina/treonina de la familia AGC que actúa como efector de las GTPasas Rho, enlazando la remodelación del citoesqueleto con la transducción de señales. PRK2 participa en vías que regulan la dinámica de la actina, el recambio de adhesiones focales, la polaridad celular y la señalización de respuesta al estrés, y también se han descrito funciones adicionales en el control transcripcional y la progresión del ciclo celular. Mediante interacciones con RhoA y proteínas andamiaje asociadas, PRK2 puede influir en programas de migración y morfogénesis que se investigan con frecuencia en biología del desarrollo y del cáncer. La desregulación de la señalización asociada a PRK2 se ha relacionado con fenotipos proliferativos e invasivos alterados en sistemas modelo, lo que respalda su relevancia para estudios mecanísticos de estados celulares vinculados a enfermedades.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO PRK2 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Pkn2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Pkn2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Pkn2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PRK2.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Pkn2 para la investigación de la señalización de PRK2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Pkn2 críticos para la función de PRK2
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Pkn2 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido PRK2 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido PRK2 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Pkn2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PRK2 (m) y el plásmido HDR PRK2 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Pkn2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Pkn2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.