Plásmido CRISPR de Activación (h) PRHOXNB: sc-416145-ACT

El gen humano URAD codifica la proteína PRHOXNB, un presunto regulador transcripcional implicado en el control de programas de expresión génica que determinan la identidad celular y las transiciones de estado. Al influir en la actividad de promotores y potenciadores, se espera que PRHOXNB se cruce con procesos centrales de regulación transcripcional y de la cromatina que coordinan la proliferación, la diferenciación y las respuestas adaptativas al estrés. La regulación anómala de redes de factores de transcripción es una característica recurrente en la biología de enfermedades complejas, lo que convierte a URAD/PRHOXNB en un objetivo relevante para estudios mecanísticos sobre el reconfigurado de vías y la plasticidad fenotípica. La modulación de la expresión de URAD ofrece una vía para investigar redes génicas aguas abajo y su contribución a comportamientos celulares dependientes del contexto.

PRHOXNB El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de URAD sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PRHOXNB El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus URAD en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional URAD, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PRHOXNB. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo URAD y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PRHOXNB en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PRHOXNB en células tumorales con expresión de URAD silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.